乳酸脱氢酶测定方法

　　我们知道，现实生活中存在着各种各样的的酶，这些酶可以单独作用，也可以相互作用，对我们的人体产生很大的影响。但是相信大家对于酶的测定方法还不是很熟悉吧，不同酶的测定有不同的方式方法，而且方式方法也种类不一。现如今乳酸脱氢酶测定方法成为很多人研究的领域话题，那么到底该如何测定呢？

　　下面就让我们一起来了解一下乳酸脱氢酶测定方法吧。

　　方法：

　　实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100&mu；l，余孔分别加标准品或待测样品100&mu；l，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

　　为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100&mu；l取1&mu；l生物素标记抗体加99&mu；l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制，37℃，60分钟。

　　3、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350&mu；l/每孔，甩干。

　　4、每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液同生物素标记抗体工作液100&mu；l，37℃，60分钟。

　　5、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350&mu；l/每孔，甩干。

　　6、依序每孔加底物溶液90&mu；l，37℃避光显色30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止。

　　7、依序每孔加终止溶液50&mu；l，终止反应此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

　　8、用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度OD值。在加终止液后15分钟以内进行检测。

　　以上内容为我们介绍了乳酸脱氢酶测定方法，我相信这些内容可以引起大家的兴趣，我相信大家可以有效的最快的直接的测定出乳酸脱氢酶，可能你也是一个研究爱好者，那就赶快去实践一翻吧！